Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делать

Методы определения гемоглобина (Hb) были впервые разработаны более ста лет назад, так что гемоглобин был одним из первых диагностических анализов крови, доступных клиницистам в первые десятилетия 20-го века, когда лабораторная медицина пребывала в зачаточной форме.

Гемоглобин состоит из четырех белковых молекул (цепей глобулина), соединенных вместе. Такие цепи содержат в себе соединение под названием гем. Включенный в его состав, он является по сути атомом железа, так необходимым для циркуляции кислорода и углекислого газа в нашем организме.

В любом случае, оценить содержание этого белка в крови необходимо для общего обследования здоровья и не только. Анализ поможет диагностировать условия, которые влияют на эритроциты. Несколько заболеваний и состояний могут влиять на них и, следовательно, уровень гемоглобина в крови.

Снижение количества Hb может привести к анемии, когда ткани и органы в организме не получают достаточного количества кислорода, вызывая усталость и слабость. Если же вырабатывается слишком много эритроцитов, выявляют полицитемию, когда кровь сгущается, вызывая вялый кровоток и связанные с этим проблемы.

Тест на уровень белка, проводят, в том числе для определения состояния пациента и контроля отклика на лечение.

Единицы измерения

Грамм(г) гемоглобина на децилитр(дц) крови, выражают уровень гемоглобина. Нормальные показатели степени Hb варьируются в зависимости от возраста и половой принадлежности человека:

  1. Новорожденные: от 17 до 22 г / дл
  2. Недельный возраст: от 15 до 20 г / дл
  3. Один месяц: от 11 до 15 г / дл
  4. Дети: от 11 до 13 г / дл
  5. Взрослые мужчины: от 14 до 18 г / дл
  6. Взрослые женщины: от 12 до 16 г / дл
  7. Мужчины старше 60: от 12,4 до 14,9 г / дл
  8. Женщины старше 60: от 11,7 до 13,8 г / дл

Между разными лабораториями эти показатели могут незначительно разниться.

Методы исследования

Сапониновый метод

Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делать

На стеклянную пластинку наносится взятая у пациента капля крови. Кровь перемешивается деревянной палочкой пропитанной раствором сапонина, около одной минуты до ее полного лизирования. Пластину помещают в прибор наблюдения и сравнивают окраску пробы с окраской оптического клина, который перемещают до совпадения интенсивностей цвета.

При применении данной методики тельца Гейнца не рассасываются, в результате чего подвергается изменению спектр поглощения, и вероятность погрешности может составлять до 30%.

Метод Сали

Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делатьПри методе Сали гемоглобин вступает в реакцию с хлористым водородом, в результате чего образуется кислотный гематин. Его разводят до состояния сопоставимости цвета раствора с окраской блока компаратора.

Затем клиницист может определить концентрацию гемоглобина путем считывания из калибровочной трубки.

Оказать влияние на исход теста могут:

  • время реакции между Hb и хлористым водородом;
  • окрас геминхлорида, напрямую обусловленный уровнем билирубина в крови;
  • уровень освещения.

Ошибка метода Сали при анализе доходит до 30%.

Химические методы

Суть химических методов состоит в выявлении уровня гемоглобина в крови на основании цвета обычной крови с кровью, имеющей в своем составе карбоксигемоглобин(COHb), под воздействием специальных реактивов. Если в крови присутствует COHb, то после добавления реактивов она слабо изменяет свой цвет или не меняет вовсе. Нормальная же кровь заметно реагирует, меня свой окрас.

Недостаток химического метода в том, что он непригоден для выявления небольшого количества COHb в крови.

Химические методы не применяются для будничных выявлений гемоглобина, несмотря на то что рекомендуются в качестве эталонных. Они имеют достаточно высокую точность, но довольно кропотливы в работе и имеют высокую стоимость.

Для обыденных лабораторных исследований более предпочтительными являются методы, описанные выше, как наиболее простые, быстрые в проведении и малобюджетны.

Спектрофотометрические методы исследования

Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делатьПринцип состоит в том, что кровь разбавляют в растворе, содержащем феррицианид калия и цианид калия. Феррицианид калия окисляет железо в геме в состояние трехвалентного железа с образованием метгемоглобина, который превращается в гемиглобинцианид (HiCN).

Преимущества метода:

  • легко адаптируется к автоматизированным гематологическим анализаторам;
  • хорошо разработан и тщательно исследован;
  • недорогой реагент.

Недостатки:

  • ручной метод требует точного спектрофотометра;
  • реагент (цианид) опасен;
  • вышеуказанное ограничивает его использование за пределами лаборатории;

Неинвазивные методы

Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делать

Некоторые неинвазивные устройства используют пульсоксиметрию, в то время как другие полагаются на белый свет и захватывают данные передачи для измерения концентрации гемоглобина в тканевых капиллярах.

Спектроскопия окклюзии — это неинвазивная измерительная техника с кольцевым датчиком, прикрепленным к пальцу субъекта. Датчик временно прекращает кровоток, инициируя оптический сигнал, который дает высокое отношение сигнал / шум.

Это обеспечивает измерение концентрации гемоглобина.

Анализатор гематологии

Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делать

Первоначальная стоимость автоматизированного анализатора высока, а регулярное техническое обслуживание и персонал лаборатории, необходимый для устройства, могут увеличить затраты.

Кроме того, требуются стабильные климатические условия, что делает его неприемлемым вариантом для нелабораторных сред.

Как проверить уровень гемоглобина на дому?

Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делатьВ настоящее время есть домашние анализаторы для определения гемоглобина в крови. Тестирование на дому предлагает много преимуществ, но необходимо также признать потенциальные компромиссы между качеством и удобством и принять меры для защиты себя от возможности ложных результатов и вашей собственной недостаточной подготовки. Поговорите со своим врачом об этом типе тестирования и проконсультируйтесь по поводу любых вопросов или проблем, которые могут возникнуть у вас.

Устройство, которое использует одну каплю крови, может быстро диагностировать анемию и позволить недорогой мониторинг на дому.

Одноразовое самотестирующее устройство использует химический реагент, который производит видимые изменения цвета, соответствующие разным уровням гемоглобина.

Вот некоторые из этих приборов:

Читайте так же:  Значения гемоглобина при онкологиях

Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делать

  • EasyTouch GCHb
  • Производитель: Bioptik
  • Средняя розничная цена: 5000р.

Анализатор гемоглобина, а также холестерина и глюкозы в крови. Является наилучшим вариантом для проведения домашнего использования. В наборе к нему поставляется:

  • тест-полоски на глюкозу в количестве 10 штук;
  • полоски на холестерин в количестве 5 штук;
  • полоски на гемоглобин в количестве 2штук;
  • Автоматическая ручка-прокалыватель;
  • ланцеты в количестве 25 штук;
  • чехол для носки.

Прибор питается от двух батареек типа АА. Время теста занимает всего 6 секунд. К особенностям прибора можно отнести функцию памяти с объемом в 200 измерений. Погрешность в показаниях прибора EasyTouch равна 20% и укладывается в нормы предъявляемые к приборам данного класса.

Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делать

  1. HemoCue Hb 201+
  2. Производитель: HemoCue AB, Швеция
  3. Средняя розничная цена: 40000р.

HemoCue Hb201+ обеспечен встроенной автоматизированной электронной системой самоконтроля. Эта система самостоятельно проводит тест на работоспособность и правильное функционирование аппарата.

В зависимости от насыщенности крови белком гемоглобина, анализатор крови, предоставляет результаты на дисплее от нескольких секунд до минуты. В настройках вы можете сами установить в чем будут проявляться показания: г/л, г/дл или в ммол/л.

В сравнении с международным эталонным методом (метод ICSH) точность Hb201+ составляет ±1.5%.

Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делать

  • ABBOTT I-STAT-1
  • Производитель: Abbott
  • Средняя розничная цена: 20000р.

Является универсальным аппаратом, с помощью которого можно провести многие необходимые тесты, не отходя от постели больного. Уникальность этого аппарата в одноразовых картриджах не требующих калибровки. Аппарат в состоянии измерить уровень гемоглобина, сахара, TCO2, HCO3, BE, сатурацию кислорода (SO2), анионный интервал.

Универсальный анализатор i-STAT:

  • не нуждается в калибровке;
  • питается от пары батареек типа АА;
  • определяет результат в течении двух минут;
  • имеет память на 5 000 результатов;
  • для связи с ПК имеется ИК-порт;
  • содержит встроенный портативный принтер.

Модель оригинальна тем, что не нуждается в приобретении специальных дополнительных материалов вне комплектации.

Если какой-либо из ваших уровней Hb не в норме, это не обязательно указывает на медицинскую проблему, требующую лечения.

Диета, уровень активности, лекарства, женский менструальный цикл и другие соображения могут влиять на результаты. Кроме того, у вас может быть повышен гемоглобин, если вы живете на большой высоте. Поговорите со своим врачом, чтобы узнать, что означают ваши результаты.

Источник: https://1pokrovi.ru/analizy-krovi/obshhij/gemoglobin/opredelenie.html

Определение гемоглобина

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Гемометр Сали (ГС-3) с комплектом принадлежностей.
  2. Концентрированная соляная кислота.
  3. Дистиллированная вода.
  4. Набор для взятия крови из пальца.

Для определения количества гемоглобина используют гемометр ГС-3 (рис. 28), особенностью которого является наличие точных стандартов и пробирки со шкалой, градуированной в грамм-процентах (рис. 28).

Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делать

Сущность метода

Гемоглобин крови под воздействием 0,1 N раствора соляной кислоты превращается в солянокислый гематин, интенсивность окраски которого сравнивают с цветом стандартов.

Для определения гемоглобина необходим 0,1 N раствор соляной кислоты, который готовят следующим образом.

В мерную колбу емкостью 1 л помещают 8,24 мл концентрированной соляной кислоты и доливают дистиллированной водой до метки; такой раствор можно также приготовить из фиксанала.

Техника определения гемоглобина

В градуированную пробирку до круговой метки (2 г%) наливают 0,1 N раствор соляной кислоты. Пробирку вставляют в гемометр. После нанесения укола в палец первую каплю крови удаляют ваткой или фильтровальной бумагой. В свежевыступнвшую каплю крови вносят кончик чистого сухого капилляра.

Плавно, без перерывов, с помощью резиновой трубки с мундштуком насасывают кровь в капилляр до круговой метки 0,02 мл. Уровень крови в капилляре регулируют, прикасаясь к его кончику кусочками фильтровальной бумаги. Вытирают кончик капилляра от крови и вносят его в 0,1 N раствор соляной кислоты, находящийся в градуированной пробирке.

Кровь выпускают в реактив тонкой струйкой, не взмучивая жидкости. Не вынимая капилляр из пробирки, его прополаскивают 2-3 раза надосадочным прозрачным 0,1 раствором соляной кислоты, затем извлекают из жидкости, прикасаясь его кончиком к стенкам пробирки, выдувают остаток жидкости и выносят из пробирки.

Кровь с соляной кислотой немедленно смешивают, постукивая по дну пробирки. Пробирку ставят в прибор на 5 минут.

Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делать

Вследствие гемолиза эритроцитов и образования солянокислого гематина жидкость буреет и становится прозрачной. Через 5 минут к испытуемой жидкости небольшими порциями прибавляют дистиллированную воду, каждый раз тщательно перемешивая жидкость с помощью стеклянной палочки. Стекающая с палочки жидкость должна полностью остаться в пробирке.

В момент, когда цвет жидкости приблизится к цвету стандартов, воду начинают прибавлять осторожно, по каплям. Разведение заканчивают, как только цвет испытуемой жидкости совсем сравняется с цветом стандартов. Цвет жидкости и стандартов сравнивают при дневном освещении в проходящем свете, держа гемометр в вытянутой руке на уровне глаз.

Определяют, на каком делении шкалы находится нижний мениск жидкости. Цена деления шкалы равна 0,2 г% (см. рис. 28).

Количество гемоглобина при оформлении в бланке анализа записывают в грамм-процентах и единицах. Грамм-проценты переводят в единицы, умножая их количество на 6, так как 1 г% соответствует 6 ед.

(100: 16,67 = 6). В норме содержание гемоглобина от 11,7 г% (70 ед.) до 18 г% (108 ед.).

После определения гемоглобина пробирку и капилляр промывают дистиллированной водой и высушивают, а гемометр укладывают в футляр.

Источник: http://ginekolog.my1.ru/publ/klinicheskie_issledovanija/blood/opredelenie_gemoglobina/39-1-0-755

Методы определения гемоглобина в крови: подробно о каждом

Гемоглобин (Hb) – молекула, с помощью которой переносится кислород. Она расположена внутри зрелых эритроцитов, лишенных ядер. Клетки получают кислород из альвеол легких, переносят его органам к клеткам-мишеням.

От них получают углекислый газ, и переносят его обратно в легочную систему. Без этого действия невозможна жизнь человека. Существуют различные состояния, при которых гемоглобин может повышаться или снижаться.

Для диагностики используют различные лабораторные методы определения функции соединения гемоглобина. Их подбирает врач индивидуально для каждого пациента.

У взрослого человека норма концентрации Hb зависит от пола:

  • женщины 11-14г/% или 110-140 г/л;
  • мужчины 12-16 г/% или 120-160 г/л.

Для мужчин норма более завышена, так как они имеют большую мышечную массу, по сравнению с женщинами.

Снижение концентрации гемоглобина наблюдается при следующих состояниях и заболеваниях:

  • сниженная концентрация эритроцитов в следствии железодефицитной, серповидно-клеточной анемии;
  • недостаточное количество веществ, которые влияют на продукцию эритроцитов (фолиевая кислота, витамин B12);
  • заболевание красного костного мозга.

Повышенная концентрация Hb наблюдается при следующих состояниях и заболеваниях:

  • повышенная продукция эритроцитов при заболевании красного костного мозга, злокачественных новообразованиях;
  • компенсаторное повышение количества эритроцитов вследствие сердечно-сосудистых и легочных заболеваний;
  • снижение количества плазмы крови вследствие чего число форменных элементов повышается в 1 л биологической жидкости.
Читайте также:  Электронный больничный лист в 2019 году, как выглядит, как оформить, инструкция для работника - 6 главных вопросов по эбл

Гемоглобин появляется в эритроцитах после утраты ядра и приобретении зрелости клетки. Местом утилизации красных кровяных клеток и Hb является селезенка. Жизненный цикл 1 клетки совместно составляет 120 дней. После гибели в кровь выделяется железо, которое поставляется в красный костный мозг. С помощью этого элемента продуцируются новые красные кровяные тельца.

Методы измерения гемоглобина в крови

Существуют следующие методы анализа гемоглобина в биологической жидкости:

  • гемиглобинцианидный;
  • гемихромный;
  • Сали;
  • аммиачный;

После использования соответствующей методики чаще всего применяют полуавтоматический анализатор, который измеряет спектр длины волны молекулы Hb.

Подсчет показателей осуществляется не только в крови, но и в моче, так как в мочевыделительной системе возможны небольшие или значительные кровотечения.

Полуавтоматический гематологический анализатор полностью исключают реставрации врачебные ошибки в отчете необходимого значения. Но прибор не сможет увидеть и распознать нарушение различных параметров.

Ручной подсчет основывается на применении реактива и биологической жидкости. Метод не подсчитывает число клеток, а определяется их присутствие или отсутствие. Подходит для мочи

Определение количества гемоглобина по методу сали: принцип определения, как делать

Унифицированные методы определения гемоглобина

Унифицированная методика – способы измерения показателей, применяемые в большинстве лаборатории. Являются точными, быстрыми, практичными. Для Hb это гемицианидный метод с фотоколориметрическим подсчетом. Позволяет выявить точное количество показателя с помощью подсчета длины волны на специализированном полуавтоматическом приборе.

Второй унифицированной методикой является гимехромный способ. Его принцип тот же, но используются более качественные реактивы, которые не приносят вреда здоровью врачей.

Гемиглобинцианидный метод определения гемоглобина в крови

У гемоглобина имеется множество форм, поэтому рассчитать длину его волны очень сложно. Для упрощения подсчета применяют специализированные химические вещества, которые переводит его в метгемоглобин.

Для получения точных результатов необходимо использовать трансформирующий раствор, специализированные измерительные пробирки, фотоэлектроколориметр. Hb имеет длину волны 540 м. Именно в таком пределе прибор подсчитывает заданный показатель.

Полученные данные подставляют в формулу, которая переводит общее количество показатели в граммы на литры (г/л).

Важно! На данный момент метод определения концентрации гемоглобина в крови используется редко, так как применяемые реактивы опасны для жизни и здоровья в врачей-лаборантов. При нарушении правил приготовления могут возникнуть ожоги кожных покровов и слизистых оболочек.

Читай подробно о гемиглобинцианидном методе в отдельной статье!

Гемихромный метод определения гемоглобина в крови

С помощью методики Hb переводится в циангемоглобин с помощью реактивов, которые полностью безопасны для человека. Для этого используют цианистые соединения (натрий додецилсульфат, лаурилсульфат).

Образуется гемихром, который подсчитывается при длине волны 540 нм. Полученные данные подставляют в формулу для перевода показателя в г/л.

Подробная статья о гемихромном методе определения гемоглобина.

Цианидный метод исследования гемоглобина в крови

Для проведения анализа используют капиллярную и венозную кровь. В биологическую жидкость человека добавляют трансформирующий раствор. С помощью него происходит преобразование всех форм Hb в метгемоглобин.

В пробирку наливают 5 мл реагента и 20 мкл биологической жидкости. Выжидают 10 минут, пока произойдет реакция. Полученную жидкость заливают в специальную кювету, фотоэлектроколориметр пропускает через нее лучи, подсчитывает элементы в области длины волны, равной 543 нм. Содержание Hb рассчитывается по формуле с помощью полученных показателей.

Метод Сали для определения гемоглобина в крови

Определение количества гемоглобина по методу Сали редко применяется в клинических учреждениях, так как существуют более совершенные способы.

Получают биологическую жидкость человека, в которую добавляют хлористоводородная кислоту. Раствор тщательно перемешивают. Это позволяет Hb перейти в другую форму – солянокислый гематин. Добавляют дистиллированную воду до тех пор, пока окрашивание не будет идентичным с контрольной пробиркой (коричневый цвет).

На нижнем мениске пробирки будет стоять цифра, которая указывает на содержание показателя в 100 г крови. Для вычисления концентрации в 1 литре, показатели умножают на 10. Процентное содержание Hb вычисляется с помощью пропорции:

16,7%=100

  • А%=Х
  • Х=А×100/16,7
  • Х – определяемый показатель,
  • А – полученное число гемоглобина с помощью гемометра,
  • 16,7 – процентное количество гемоглобина в контрольной пробе.

Метод спектрального анализа для измерения гемоглобина

Наиболее точным методом определения гемоглобина является использование спектрофотометра. Он определяет только 1 из форм гемоглобина, улавливая длину его волны. В крови человека существуют различные формы Hb:

  • Оксигемоглобин;
  • Дезоксигемоглобин;
  • Карбоксигемоглобин;
  • Метгемоглобин.

Для исследования с помощью спектрофотометра необходим перевод показателей только в 1 из форм. Для этого применяют различные реактивы. Показатель окрашивается определенным цветом (красный, зеленый). Его длину волны улавливает прибор, подсчитывает все элементы в заданной траектории.

Аммиачный метод определения гемоглобина

Аммиачный метод количественного определения гемоглобина соответствует предыдущим способам. Разницу составляет использование аммиака в концентрации 0,04%.

Проба должна настояться, чтобы произошла реакция перехода всех форм Hb в одну. Ее рассчитывают с помощью полуавтоматического анализатора в виде спектрофотометра. Раствор помещают в кювету, устанавливают в прибор.

Рассчитывают показатель на длине волны 543 нанометров.

Методы определения гемоглобина в моче

Существует 4 разновидности исследования мочи. Каждая из них отличается применяемыми реактивами. Для исследования собирают только свежую порцию урины. Если она настоится, Hb превратиться в медгемоглобин, Поэтому реакция будет невозможна. Урину подготавливают. Для этого к ней добавляет 2 мл уксусной кислоты и 5 мл диэтилового эфира.

  • Реакция с гваяковой кислотой. Разводят щепотку кислоты, добавляют 3 мл этанола 96%. Добавляют 8-10 капель получившейся жидкости к 8-10 каплям разведенной урины. Если Hb присутствует в образце, он окрашивается в синий цвет.
  • Реакция с амидопирином. К 2-3 мл разведенной урины добавляют 10 капель раствора амидопирина и 10 капель 3% перекиси водорода. Если Hb присутствует, урина окрашивается в фиолетовый цвет.
  • Реакция с бензидином. В пробирку добавляют 6 капель бензидина, 6 капель 3% перекиси водорода,4 капли чистой урины. Если Hb присутствует, получившаяся жидкость окрашивается в зеленый цвет.
  • Использование тест-полосок, таблеток. Они содержат специализированные реактивы в готовом виде. Полоски опускают в мочу, достают, оценивают цветовую шкалу. Таблетки полностью растворяют в биологической жидкости человека. Индикаторная шкала подписана на упаковке.

Какой метод определения гемоглобина наиболее точный?

Наиболее точным методом определения показателя считается фотоколориметрический с использованием гемихромного разведения. С помощью него снижается риск врачебной ошибки. Прибор автоматически подсчитывает показатель. Здесь важно правильно подготовить приборы, пробирки, кюветы, настроить аппарат. Методика безопасна для лаборанта.

В определении Hb в моче наиболее информативным является использование тест-полосок. Здесь полностью исключается риск неправильного разведения реактивов. 

Определение гемоглобина является важным информативным тестом. Можно определить кровотечение в мочевыводящих путях, состояние сердечно-сосудистой и легочной системы.

С помощью методов вовремя выявляются различные виды анемии при низких концентрациях гемоглобина. После получения данных рекомендуется обратиться к лечащему врачу.

Он расшифрует полученный результат, выявит нормы и отклонения, назначит лечение. 

  • Узнай о методах определения гликозилированного гемоглобина в крови!
  • Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

Источник: https://mirmam.pro/metody-opredeleniya-gemoglobina-v-krovi

3) Определение количества гемоглобина в крови по способу сали

Определение содержания гемоглобина в крови производится колориметрическими способами, один из которых (гематиновый метод Сали) основан на образовании устойчивого раствора коричневого цвета при взаимодействии гемоглобина с соляной кислотой.

Принцип колориметрического способа заключается в том, что если исследуемый раствор путем разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в обоих растворах будет одинакова, а количества веществ будут соотносится как их объемы.

В стандартном растворе гемоглобина содержится 167 г/л.

Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику определения гемоглобина и найти содержание гемоглобина в исследуемой крови.

Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: гемометр Сали, капилляр с меткой 0,02 мл, 0,1 н раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, свежая кровь, пипетка, стеклянная палочка, стерильная инъекционная игла, вата, спирт, йод, эфир, стерильный скарификатор. Объект исследования — человек.

Х о д р а б о т ы

В среднюю пробирку гемометра налить 0,1 н раствор соляной кислоты до нижней кольцевой метки. Из пальца обычным способом набрать в капилляр кровь без пузырьков до метки. Излишек крови можно удалить из капилляра прикладыванием ваты или фильтровальной бумаги к кончику капилляра.

Выдуть кровь на дно пробирки из капилляра так, чтобы верхний слой кислоты остался неокрашенным. Не вынимая капилляр, промыть его раствором соляной кислоты из верхнего слоя пробирки гемометра. После этого содержимое пробирки перемешать стеклянной палочкой и поставить в гемометр на 5-10 мин.

Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин

Затем к содержимому пробирки прибавить по каплям дистиллированную воду, каждый раз перемешивая раствор стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет полученного раствора не станет одинаковым с цветом стандартного раствора боковых ампул гемометра. Цифра, стоящая на уровне нижней границы мениска полученного раствора отражает содержание гемоглобина в исследуемой крови в грамм-процентах (г%).

Перевод полученных данных в единицы системы СИ (в г/л) производят путем умножения измеренного количества гемоглобина в г% на 10. Зарисовать гемометр и капилляр.

В выводе сравнить с нормой полученное содержание гемоглобина в исследуемой крови.

4) Подсчет количества эритроцитов

Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику и определить количество эритроцитов в исследуемой крови.

Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: микроскоп, счетная камера Горяева, меланжер для эритроцитов, 3 % раствор хлорида натрия, покровные стекла, регулируемая пипетка, пробирки, стерильный скарификатор, вата, спирт, эфир, йод. Объект исследования — человек.

Х о д р а б о т ы

Необходимо перед началом работы рассмотреть счетную камеру под микроскопом, найти малые квадратики и большие квадраты сетки (рис.1).

Камеру предварительно необходимо подготовить путем притирания покровного стеклышка к боковым выступающим граням камеры до появления цветных (ньютоновских) колец.

В каплю свежей крови, полученной из пальца, погрузить кончик меланжера (с красной бусинкой в расширении) для эритроцитов и набрать кровь до метки 0,5, следя, чтобы в капилляр не

попали пузырьки воздуха. Быстро, пока кровь не свернулась, перенести кончик меланжера в 3 % раствор хлорида натрия и набрать его до метки 101, т.е. развести кровь в 200 раз. После этого взять заполненный меланжер (смеситель), зажать его концы 1 и 3 пальцами и в течение 1 мин встряхи-

вать. После тщательного перемешивания крови, удалив предварительно 1-2 капли, нанести небольшую капельку на сетку камеры.

При необходимости такое же разведение может быть выполнено другим способом. Например, 0,02 мл крови смешать с 4 мл 3 % NaCl в пробирке. Содержимое пробирки в этом случае тщательно перемешивается.

Если капля разведенной крови будет слишком велика, то жидкость может попасть на боковые грани камеры и высота слоя над сеткой будет больше 0,1 мм. В этом случае камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова. Разведенную (в меланжере) кровь следует еще раз перемешать.

Заполнив камеру, поместить ее под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступить к подсчету. Считать эритроциты удобнее при большом увеличении.

Необходимо подсчитать число эритроцитов в 5 больших квадратах, расположенных в разных местах сетки, например, по диагонали.

Во избежание двухкратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратиками, руководствоваться правилом Егорова, согласно которому, относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе для данного квадратика не учитываются.

  • Формула для вычисления количества эритроцитов в 1 мм3 крови:
  • А х 4000 х 200
  • N = ————————, где:
  • 80
  • N — искомое число эритроцитов;
  • А — число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках (или в 5 больших);
  • 4000 — множитель для получения содержания эритроцитов в одном мм3 крови;
  • 200 — степень разведения эритроцитов.
Читайте также:  Фактор фон виллебранда: норма, причины отклонений, лечение

Для перевода полученного количества эритроцитов в единицы СИ, подсчитанное количество эритроцитов умножить на 106 и выразить в N х 1012 /л (тера на литр). Зарисовать фрагмент сетки камеры Горяева с маленькими и большими квадратами.

В выводе сравнить количество подсчитанных эритроцитов с нормой.

Источник: https://studfile.net/preview/5243420/page:2/

Методика забора крови из пальца. Определение гематокрита. Определение количества гемоглобина в крови по способу Сали

1) МЕТОДИКА
ЗАБОРА КРОВИ ИЗ ПАЛЬЦА

     При заборе крови следует помнить о
возможной ее инфицированности вирусом СПИДа, гепатита В и связанным с этим
повышенным риском заражения, которому подвергаются лаборанты, проводящие
серологические и клинические исследования. Поэтому при проведении анализа крови
нужно руководствоваться правилами о профилактике СПИДа у медицинского
персонала, занятого забором крови и ее исследованием.

     
Ц е л ь   р а б о т ы: освоить методику получения крови из пальца.

     Д л я  р а б о т ы  н е о б х о д и м
ы: стерильный скарификатор, спирт, вата, йод, эфир. Объект исследования —
человек.

Х о д  р а б о т ы

     1. Пациент должен сидеть напротив
проводящего забор крови, рука (лучше левая) находится на столе.

     2. Забор крови осуществляют из 4-го
пальца, т.к. синовиальное влагалище его изолировано, что предотвращает
распространение воспалительного процесса в случае его возникновения на кисть.

   
3. Кожа пальца дезинфицируется и обезжиривается спирт-эфиром.

    4. Скарификатор берут пинцетом из
стерилизатора за середину, а затем рукой за  конец, противоположный колющему,
подняв скарификатор острием вверх, чтобы капля воды не стекала на режущий край.
Лучше пользоваться одноразовыми скарификаторами.

    5. Прокол кожи делают в подушечке
пальца в центральной точке, скарификатор погружают на всю глубину режущей
поверхности.

    6. Первую каплю крови снимают сухой
ватой, тщательно вытирают палец (кожа  должна быть сухой).

    7. Следующая капля крови должна иметь
выпуклый мениск и не растекаться по пальцу, из этой и последующей капель кровь
берется для анализа.

   
8. После забора крови место укола обрабатывается спиртом или настойкой йода.

2) ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ГЕМАТОКРИТА

     Гематокритом называют выраженное в
процентах отношение объема форменных элементов к объему цельной крови.

     Существует несколько методик
определения гематокрита. Все они основаны на  центрифугировании предотвращенной
от свертывания крови, набранной в капилляр и измерении столбиков крови и
осевших эритроцитов. Настоящий вариант метода определения гематокрита
разработан на кафедре нормальной физиологии МГМИ.

     Ц е л ь  р а б о т ы: освоить методику
определения гематокрита и определить его величину в исследуемой крови.

     Д л я  р а б о т ы  н е о б х о д и м
ы: гибкая полиэтиленовая трубочка, центрифуга, раствор гепарина в разведении
1:10 в 0,9 % NaCI, инъекционные иглы, шприц, вата, спирт, йод. Объект
исследования — человек.

Х о д   р а б о т ы

     Перед забором крови гибкую
полиэтиленовую трубочку промыть раствором гепарина. При помощи шприца набрать в
трубочку кровь без пузырьков на 2/3 ее длины. Перегнуть трубочку посередине и
поместить в узкую пробирку открытыми концами вверх. Центрифугировать 20 минут
при 3000 об/мин.

После центрифугирования измерить линейкой столбик набранной
крови в выпрямленной трубочке и измерить столбик эритроцитов в мм, вычислить
процентное соотношение. За 100 % принять длину столбика всей набранной крови,
за Х — длину столбика эритроцитов, тогда найденное значение Х % будет
соответствовать показателю гематокрита крови.

Для перевода гематокрита,
выраженного в % в единицы системы СИ полученную величину умножить на 0,01.

  •     
    В выводе сравнить полученный показатель гематокрита с нормой.
  • 3) ОПРЕДЕЛЕНИЕ
    КОЛИЧЕСТВА ГЕМОГЛОБИНА
  • В КРОВИ ПО СПОСОБУ
    САЛИ

     Определение содержания гемоглобина в
крови производится колориметрическими способами,  один  из которых (гематиновый
метод Сали) основан на образовании  устойчивого  раствора  коричневого цвета
при взаимодействии гемоглобина с соляной кислотой.

Принцип колориметрического
способа заключается в том, что если исследуемый раствор путем разбавления
довести  до окраски, одинаковой со стандартным раствором,  то концентрация
растворенных  веществ  в обоих растворах  будет одинакова,  а  количества 
веществ  будут соотносится как их объемы.

В стандартном растворе гемоглобина
содержится 167 г/л.

     Ц е л ь  р а б о т ы: освоить методику
определения гемоглобина и найти содержание гемоглобина в исследуемой крови.

     Д л я  р а б о т ы  н е о б х о д и м
ы: гемометр Сали, капилляр с меткой 0,02 мл,  0,1 н раствор соляной кислоты,
дистиллированная вода, свежая кровь, пипетка, стеклянная палочка, стерильная
инъекционная игла,  вата,  спирт,  йод, эфир, стерильный скарификатор. Объект
исследования — человек.

Х о д  р а б о т ы

      
В среднюю пробирку гемометра налить 0,1 н  раствор  соляной кислоты  до  нижней
кольцевой метки.  Из пальца обычным способом набрать в капилляр кровь без
пузырьков до метки. Излишек крови можно  удалить из капилляра прикладыванием
ваты или фильтровальной бумаги к кончику капилляра.

  Выдуть кровь на дно
пробирки из капилляра так, чтобы верхний слой кислоты остался неокрашенным.  Не
вынимая капилляр,  промыть его  раствором  соляной кислоты из верхнего слоя
пробирки гемометра.  После этого содержимое пробирки перемешать стеклянной
палочкой и поставить в  гемометр на 5-10 мин.

Это время необходимо для полного
превращения гемоглобина в солянокислый гематин

Затем к содержимому
пробирки прибавить по  каплям дистиллированную воду, каждый раз перемешивая 
раствор  стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет полученного раствора не
станет  одинаковым  с  цветом стандартного раствора  боковых ампул гемометра.
Цифра, стоящая на уровне нижней  границы мениска полученного раствора отражает
содержание гемоглобина в исследуемой крови в грамм-процентах (г%).

     Перевод 
полученных  данных  в   единицы  системы  СИ (в г/л) производят путем умножения
измеренного количества гемоглобина в г%  на 10.        Зарисовать гемометр и
капилляр. 

  1.       В выводе сравнить с нормой полученное
    содержание гемоглобина в исследуемой крови.
  2. 4) ПОДСЧЕТ 
    КОЛИЧЕСТВА ЭРИТРОЦИТОВ
  3.      Ц е л ь  р а б о т ы: освоить методику
    и определить количество эритроцитов в исследуемой крови.

     Д л я  р а б о т ы  н е о б х о д и м
ы: микроскоп, счетная камера Горяева, меланжер для эритроцитов, 3 % раствор
хлорида натрия, покровные стекла, регулируемая пипетка, пробирки, стерильный
скарификатор, вата, спирт, эфир, йод. Объект  исследования — человек.

Х о д  р а б о т ы

     Необходимо перед началом работы
рассмотреть счетную камеру под микроскопом, найти малые квадратики и большие
квадраты сетки (рис.1).

Камеру предварительно необходимо подготовить путем
притирания покровного стеклышка к боковым выступающим граням камеры до
появления цветных (ньютоновских) колец.

В каплю свежей крови, полученной из
пальца, погрузить кончик меланжера (с красной бусинкой в расширении)  для
эритроцитов и набрать кровь до метки 0,5, следя, чтобы в капилляр не

попали пузырьки воздуха. Быстро, пока кровь
не свернулась, перенести кончик меланжера в 3 % раствор хлорида натрия и
набрать его до метки 101, т.е. развести кровь в 200 раз. После этого взять
заполненный меланжер (смеситель), зажать его концы 1 и 3 пальцами и в течение 1
мин встряхи-

вать. После тщательного перемешивания
крови, удалив предварительно 1-2 капли, нанести небольшую капельку на сетку
камеры.

При необходимости такое же разведение может
быть выполнено другим способом. Например, 0,02 мл крови смешать с 4 мл 3 % NaCl
в пробирке. Содержимое пробирки в этом случае тщательно перемешивается.

Если капля разведенной крови будет слишком
велика, то жидкость может попасть на боковые грани камеры и высота слоя над
сеткой будет больше 0,1 мм. В этом случае камеру следует промыть
дистиллированной  водой, насухо вытереть и заполнить снова. Разведенную (в
меланжере) кровь следует еще раз перемешать.

Источник: https://vunivere.ru/work12355

Работа №3. Определение гемоглобина методом Сали

Практические работы. Работа № 1. Забор крови из пальца.

Правильное получение капиллярной крови является одним из решающих условий, обеспечивающих точность и воспроизводимость результатов. Общее время, затрачиваемое на взятие крови, не должно превышать 2 — 3 мин. Во взятой крови должны отсутствовать признаки свертывания.

Оборудование:спирт, вата, стерильный скарификатор, Камера Горяева, покровное стекло, 3,0% раствор NaCl, пипетки на объем не менее 5 мл, капилляры Сали, раствор цитрата натрия, линейка, трансформирующий раствор, стандартный раствор гемоглобина с известной концентрацией гемоглобина (120г/л), спектрофотометр, кюветы.

Ход работы. Вымойте руки с мылом в проточной воде, высушите их. Забор крови производите из большого или безымянного пальца левой руки (допустимо получать кровь из любого другого пальца). Берущий кровь должен пользоваться резиновыми перчатками.

Кожу подушечки пальца протрите ватным тампоном, смоченным 70 % спиртом, и дождитесь ее высыхания. Левой рукой слегка сдавите мякоть пальца в области предполагаемого укола. В правую руку возьмите стерильный скарификатор, ориентируя его строго перпендикулярно к поверхности кожи в месте укола.

Наиболее удобным местом прокола кожи является точка слева от срединной линии на некотором расстоянии от ногтя. Укол производите на всю глубину острия иглы, рассекая при этом кожу поперек дактилоскопических линий. Первую каплю крови удалите, потому что она содержит случайные примеси, лимфу и поврежденные форменные элементы.

Далее забирайте кровь на необходимые анализы. После окончания забора крови к месту прокола приложите ватный тампон, смоченный спиртом или раствором йода. Забор крови из пальца осуществляйте в специальные в каждом случае стеклянные капилляры для стандартизации процесса взятия крови.

При этом капилляры предварительно обработайте антикоагулянтом — веществом, препятствующим свертыванию крови — гепарином или раствором лимоннокислого натрия (цитрата натрия).

Работа №2. Подсчет количества эритроцитов в камере Горяева

Принцип метода состоит в подсчете эритроцитов в камере Горяева. Для уменьшения концентрации форменных элементов и создания удобной для подсчета их концентрации кровь предварительно разводится стандартным образом.

Ход работы. Разводят исследуемую кровь в 200 раз. Для этого в сухую пробирку отмеривают 4 мл 3,0% раствор NaCl. Пипеткой набирают 0,02 мл крови. Или с использованием меланжера (смесителя).

После тщательного перемешивания раствора крови небольшой каплей заполните подготовленную — с притертым стеклом камеру Горяева. Камеру перед заполнением промойте водой и насухо вытрите.

На участок камеры, где нанесены сетки, уложите обезжиренное покровное стекло, при этом нижняя поверхность камеры должна находиться на третьих пальцах обеих рук, двумя вторыми пальцами придерживайте ее спереди.

Двумя пальцами притрите покровное стекло, плавно продвигая его по поверхности прямоугольных пластинок до появления цветных колец Ньютона в местах соприкосновения покровного стекла с поверхностью пластинок камеры.

Каплю исследуемой жидкости пипеткой поместите перед щелью, образованной покровным стеклом и пластинкой камеры Горяева с нанесенной сеткой. Капля должна заполнить камеру самотеком (под действием капиллярных сил). Следите, чтобы в пространстве над сеткой не было пузырьков воздуха и избытка жидкости.

До начала подсчета оставьте счетную камеру на 1 — 2 мин для осаждения форменных элементов. Камеру положите на столик микроскопа и настройте его на малое увеличение (объектив 8 — 9, окуляр 10 или 15). Подсчет производите при несколько опущенном конденсоре. Хорошую контрастность обеспечивает фазово-контрастное устройство.

Эритроциты считайте в пяти больших квадратах, состоящих из 16 малых (5 ´ 16 = 80 малых), расположенных по диагонали. Для записи результатов рекомендуется предварительно расчертить на листе 5 больших квадратов, разлинованных 4х4 и записывать найденное число эритроцитов в каждую клеточку.

При подсчете необходимо помнить правило буквы «Г».

Подсчитав число эритроцитов в 80 маленьких квадратах (N) рассчитывают число клеток в 1 мкл (мм3) крови (X). Для этого учитывается разведение в 200 раз, объем камеры над одним маленьким квадратиком 1/4000 мкл и то, что клетки подсчитывались в 80 таких квадратах. Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

Читайте также:  Маточное кровотечение: причины, симптомы, лечение в стационарных и домашних условиях

Х=(Nх4000х200)/80

где N/80 — среднее число клеток в 1 малом квадрате; 1/4000 — объем камеры под малым квадратом; 200 — степень разведения крови. Внимание! Счет количества клеток в квадратах камеры Горяева проводится по правилу Егорова: к данному квадрату относятся только те клетки, которые находятся внутри квадрата или на его верхней и левой границе.

Полученное количество эритроцитов можно также выразить в количестве на 1л крови (умножением полученного количества на 106), что является стандартной размерностью этого показателя.

Работа №3. Определение гемоглобина методом Сали.

Гематиновый метод Сали основан на образовании устойчивого раствора коричневого цвета при взаимодействии гемоглобина с НС1.

Гемометр Сали представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штатив вставлены 3 пробирки одинакового диаметра. Две крайние пробирки запаяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина; средняя – градуирована. Она предназначена для проведения исследования. Стандартный раствор солянокислого гематина по цвету соответствует 167 г/л гемоглобина.

Ход работы. в среднюю пробирку наливают 0,1 Н р-р НСl до нижней метки. Пипеткой берут 0,02 мл кровиизпальца до метки, обтирают ее кончик ватой и выдувают кровь на дно пробирки так, чтобы верхний слой кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетку, споласкивают ее кислотой.

После этого содержимое пробирки перемешивают и ставят в штатив на 5–10 мин. Это время необходимо для полного превращения Нb в солянокислый гематин. Затем к содержимому пробирки добавляют по каплям дистил.

воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет совершенно одинаков с цветом стандарта (добавляя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой).

Рекомендации к оформлению работы.Цифра на уровне верхней границы полученного раствора, показывает абсолютное содержание Hb в испытуемой крови, выраженное в г-%. Значение следует перевести в г/л, т. е. умножить на 10.

Источник: https://studopedia.net/6_91360_rabota—opredelenie-gemoglobina-metodom-sali.html

Точное определения количества гемоглобина различными методами — БГМУ

Загрузка…

Рекомендуется следующий способ более точного определения количества гемоглобина в гемометре Сали с отмытыми эритроцитами.Наручные часы купить легко и недорого, на сайте watchcenter.com.ua На сайте реализована бесплатная доставка для жителей Украины. Товар действительно качественный.

Рекомендуется следующий способ более точного определения количества гемоглобина в гемометре Сали с отмытыми эритроцитами.

Налить в пробирочку Сали 1 % раствор хлористого натра до верхней метки (140), взять обычным путем 20 мм3 крови, внести в пробирку, хорошо перемешать и вставить пробирку в центрифугу на 10-15 мин.

Затем осторожно снять верхнюю прозрачную жидкость до метки 10 тонкой пипеткой с насаженной на нее маленькой грушей, встряхнуть осевшие эритроциты в оставшейся жидкости и добавить до метки 20 0,02 н.

раствора соляной кислоты, перемешать, дать постоять 5 мин и разводить, как обычно, до цвета контрольной трубочки.

В случаях резких анемий рекомендуется брать двойное количество крови (2 раза по 20 мм3) и результаты определения разделить на два.0,02 н. раствор соляной кислоты легко приготовить из 0,1 н. фиксанала, разведя содержимое ампулы до 500 мл (а не до литра),

Счетные камеры употребляются в лаборатории – открытые и закрытые с сетками Тома – Цейсса, Бюркера, Тюрка, Предтеченского, Горяева и др.

Закрытые камеры типа Тома-Цейсса после закрытия покровным стеклом не имеют сообщения с наружным воздухом. Они требуют предварительного наполнения камеры и последующего притирания покровного стекла. В камере Тома-Цейсса и в других камерах покровные стекла употребляются шлифованные и притираются до образования ньютоновых колец.

В сетке Тома-Цейсса имеется 400 маленьких квадратиков (20 рядов по 20 штук), площадь каждого. Тройные линии отделяют большие квадраты, равные маленьким. Расстояние между поверхностью камеры и покровным стеклом – высота камеры – 10 мм.

В открытых камерах типа Бюркера покровное стекло притирается к боковым шлифам до наполнения камеры, имеющей сообщение с наружным воздухом в виде щели, через которую и производится наполнение камеры.

Очень удобны камеры с зажимами, в особенности с Т-образными клеммами, где при соответствующей чистоте камеры и покровных стекол ньютоновы кольца получаются сразу простым придавливанием зажимами.

Если в процессе работы жидкость проникает между покровными стеклами и шлифами и ньютоновы кольца исчезнут, камеру следует разобрать и, тщательно вытерев, снова наполнить ее новой каплей разведенной крови.

В сетке Бюркера имеются малые и большие квадраты: малый равен квадратику Тома-Цейсса 1/400 мм2. Плошадь больших квадратов – 11% мм2; высота камеры – V10 мм. Малых квадратиков 13 рядов, по 13 штук в ряду; больших – 12 рядов по 12 штук. Наложением сетки Тома-Цейсса на сетку Бюркера получают сетку Тюрка.

Удобна также для работы выпускаемая открытая камера типа Бюкера с сеткой Горяева (рис. 6). В ней также имеются маленькие и большие квадраты, расположенные группами – маленькие по 16 штук в группе, большие по 4 в ряду.

Смесители (меланжеры): для счета эритроцитов употребляется узкий капилляр с широкой ампулой и красной бусинкой в ней, метки – 0,5; 1,0; 101; для счета лейкоцитов – широкий капилляр с маленькой ампулой и белой бусинкой, метки – 0,5; 1,0; 11. Для счета лейкоцитов нужна большая капля крови.

Разводящей жидкостью для счета эритроцитов служит 1% раствор поваренной соли; для лейкоцитов – 3% раствор уксусной кислоты (для растворения эритроцитов), к которому прибавлено несколько капель насыщенного раствора метилвиолета или метиленовой синьки для выявления ядер лейкоцитов.

Работа с меланжерами: укол, как сказано выше, делают достаточно глубоким; первую каплю стирают сухой ваткой, затем кончик сухого смесителя вставляют в каплю крови делениями к глазу, медленно втягивают кровь до 0,5 (разведение в 200 раз в смесителе для эритроцитов и в 20 раз в смесителе для лейкоцитов), обтирают кончик, затем, вертикально вставив в рюмочку с разводящей жидкостью, в втягивают жидкость до метки 101 (для лейкоцитов соответственно до метки 11), поворачивая смеситель в разные стороны вокруг . продольной оси, вынимают из рюмочки, зажимают осели, после этого приступают к счету их с окуляром 15Х, объективом 8х.

Источник: http://bgmy.ru/3024-tochnoe-opredeleniya-kolichestva-gemoglobina-razlichnymi-metodami.html

Определение гемоглобина в крови – методы диагностики, строение и физиология гемоглобина

Гемоглобин – это четвертичная глобула, которая занимается утилизацией и поставкой оксидов в организме человека. Данное пептидное соединение является тетрамером, состоящим из четырех субъединиц. Одна полипептидная структура способна переносить через кровоток до четырех молекул кислорода.

Железосодержащий белок

Гемоглобин состоит из простетической группы и глобулина. Простетическую группу железосодержащего пептида принято называть «гемом». Благодаря гему кровь приобретает свойственный ей окрас – алый или синевато-красный. Простетическая группа содержит железо, которое участвует в восстановительно-окислительных процессах.

Различают несколько основных видов гемоглобина:

  • Оксигемоглобин;
  • Карбоксигемоглобин;
  • Дезоксигемоглобин;

Оксигемоглобин образуется при присоединении кислорода к гемоглобину в условиях высокого парциального давления. При отщеплении кислорода от железосодержащего белка образуется устойчивая форма – дезоксигемоглобин.

Карбоксигемоглобин появляется в результате присоединения монооксида или диоксида углерода.

Стоит отметить, что монооксид углерода в 250 раз эффективнее связывается с железосодержащим белком, чем обуславливается его опасность для жизни при вдыхании (угарный газ).

Дезоксигемоглобин сильно токсичен для тканей человеческого организма, поэтому существуют специальные системы «ликвидации» гемоглобина в крови. Этим занимается особое пептидное соединение – гаптоглобин.

Другой набор методов диагностики уровня гемоглобина в крови

Метод базируется на свойстве железосодержащего белка превращаться в хлорид гематита под действием соляной кислоты. Методика Сали считается неинвазивным вмешательством.

Интенсивность цвета жидкости прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в крови. Раствор хлоргемина при проведении исследования разводят дистиллированной водой до стандартного цветового спектра.

Метод Салли

Важно! Стоит отметить, что гемоглобин по Сали не получил широкого распространения на территории РФ.

Метод, который применяется для определения уровня гемоглобина, принято называть «гемометром Сали». Другое название современного метода определения гемоглобина по Сали – гемоглобинометрия. Такой колориметрический аппарат состоит из специального штатива, который имеет три гнезда.

Боковые гнезда держат две склянки с веществами. Среднее гнездо данного прибора необходимо для размещения пронумерованной мензурки из стекла.

Градуированная мензурка обладает шкалой с делениями, которые измеряют количество железосодержащего пептидного соединения в граммах на децилитр (г/дл).

При клиническом исследовании крови используется специальная пипетка для воды и размешивания содержимого склянки.

При проведении полного анализа по методу Сали вначале в склянку наливается 0.10% раствор соляной кислоты. Потом выполняется забор исследовательского материала из кончика пальца в пипетку до отметки «0.04 мл». Впоследствии пипетку обтирают стерилизованной ваткой и размещают в мензурку с раствором HCl.

Медицинский сотрудник несколько раз встряхнет содержимое пробирки и поставит отстаиваться. Полное химическое превращение железосодержащего пептидного соединения в растворе соляной кислоты происходит не менее чем за 10-15 минут.

По истечении пяти минут оценивается цвет жидкости в гемометре со стандартными цветами. Как правило, он более темный, нежели в стандартных пробирках.

Используя обычную пипетку к раствору постепенно добавляют чистую воду, попеременно перемешивая содержимое и сравнивая со стандартным цветом. На окончательном этапе цвет материала должен сравняться с нормативом.

После всего вышеперечисленного замеряют уровень жидкости и проводят соответствующие подсчеты.

В промышленном масштабе выпускаются гемометры, которые содержат исключительно грамм-процентную градуированную шкалу. Нормой гемоглобина у мужчин и женщин принято считать значения 15 г%, или 168 г/дл. Но даже при соблюдении определенных правил наблюдаются небольшие погрешности в измерениях. В некоторых случаях разные результаты могут в значительной мере исказить данные о болезни.

Стандартизированным и наиболее точным методом определения гемоглобина принято считать гемоглобинцианидный анализ. Такая методика базируется на свойстве железосодержащего пептидного соединения превращаться в цианметгемоглобин при добавлении к биологическому материалу определенного вещества.

Содержание цианметгемоглобина замеряют фотометрически. При анализе крови в роли реактива применяется раствор Драбкина. Железосодержащий белок под влиянием синеродисто-железистого калия превращается в метгемоглобин, который потом преобразуется в присутствии цианина калия в гемиглобинцианид.

Цианметгемоглобиновый метод

Типичное соотношение разведения биологического материала с реагентом — 2 : 500 (0,04 миллилитров капель крови и 10 мл реактива).

По истечении 30 минут, которые нужны для полного преобразования железосодержащего пептида в гемиглобинцианид, измеряют «гашение» при длине волны в 550 нанометров и плюс толщине слоя в 2 см против воды на спектрофотометре СФ или на ФЭК и ему похожей технике. С помощью СФ также измеряют уровень свободного железосодержащего пептида в плазме.

На данный момент разработаны гемиглобинцианидные цветовые стандарты в ампулах, которые точно соответствуют определенному уровню железосодержащего белка. Растворы, полученные в результате определенных реакций, исследуют с помощью колориметрии. После всего рисуют рабочие таблицы и узнают, какое количество железосодержащего пептидного соединения содержится в кровотоке.

Есть устройства, специально созданные для определения количества гемоглобина. Зачастую используются именно циангемоглобиновые методы определения гемоглобина.

Как правило, гемоглобинометрические приборы могут работать самостоятельно. Широкое применение такие тест-устройства для определения гемоглобина в крови получили в домашних условиях.

Однако в ряде ситуаций больные не учитывают влияние внешних факторов в доме (стресса, еды).

Значительную известность и распространение среди различных лабораторий получила методика гемихром (или гемихромный метод). Принцип данного метода основан на преобразовании всех форм железосодержащего пептида в гемихром, который имеет красноватый цвет. Преимущество гемихромного метода заключается в том, что он не является токсичным.

Иногда назначают прохождение биохимического исследования на гликированный гемоглобин. Стоит отметить, что важное значение гликозилированный гемоглобин и глюкометр имеют при диагностике сахарного диабета.

Глюкометр

При определенных состояниях в моче может содержаться гемоглобин, поэтому нередко данная биологическая жидкость и ее анализы являются важными частями диагностики различных заболеваний. Такое случается при переливании несовместимой крови от донора, в особенности у ребенка.

Источник: https://serdse.top/metody-opredeleniya-soderzhaniya-gemoglobina-krovi/

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector